Witamina D jest witaminą, a jednocześnie hormonem steroidowym, obejmującym głównie witaminy D2 i D3, których struktura jest bardzo podobna. Witaminy D3 i D2 są przekształcane w 25-hydroksylową witaminę D (w tym 25-dihydroksylowe witaminy D3 i D2). 25-(OH)-D w organizmie człowieka charakteryzuje się stabilną strukturą i wysokim stężeniem. 25-(OH)-D odzwierciedla całkowitą ilość witaminy D i zdolność witaminy D do jej konwersji, dlatego 25-(OH)-D jest uważany za najlepszy wskaźnik oceny poziomu witaminy D. Zestaw diagnostyczny oparty jest na immunochromatografii i pozwala uzyskać wynik w ciągu 15 minut.