วิตามินดีเป็นทั้งวิตามินและฮอร์โมนสเตียรอยด์ โดยส่วนใหญ่ประกอบด้วยวิตามินดี 2 และวิตามินดี 3 ซึ่งมีโครงสร้างคล้ายคลึงกันมาก วิตามินดี 3 และวิตามินดี 2 จะถูกเปลี่ยนเป็น 25-ไฮดรอกซิลวิตามินดี (รวมถึง 25-ไดไฮดรอกซิลวิตามินดี 3 และดี 2) 25-(OH)VD ในร่างกายมนุษย์มีโครงสร้างที่เสถียรและมีความเข้มข้นสูง 25-(OH)VD สะท้อนถึงปริมาณวิตามินดีทั้งหมดและความสามารถในการเปลี่ยนวิตามินดี ดังนั้น 25-(OH)VD จึงถือเป็นตัวบ่งชี้ที่ดีที่สุดในการประเมินระดับวิตามินดี ชุดตรวจวินิจฉัยนี้ใช้หลักการอิมมูโนโครมาโทกราฟีและสามารถให้ผลลัพธ์ได้ภายใน 15 นาที